Glazen flessen veilig autoclaveren
Door DWK Life Sciences
Een autoclaaf is een gespecialiseerd apparaat dat is ontworpen om een fysieke methode voor desinfectie en sterilisatie te bieden. Het proces wordt bereikt met behulp van een combinatie van stoom, hoge druk, en tijd. Stoom is opmerkelijk effectief bij het overbrengen van thermische energie (in vergelijking met droge lucht) en kan een lading bij 121°C in slechts 15 minuten steriliseren.
De meeste glazen laboratoriumflessen zijn geschikt voor autoclaveren. Het is echter belangrijk om rekening te houden met enkele belangrijke verschillen tussen de soorten glazen producten die in het laboratorium worden gebruikt alsook met de beste praktijkmethoden bij het uitvoeren van een autoclaafcyclus.
In dit artikel beantwoorden we veelgestelde vragen met advies waarmee u glazen flessen veilig kunt autoclaveren.
1) Is het veilig om alle soorten glazen laboratoriumflessen te autoclaveren?
Voordat laboratoriumflessen worden geautoclaveerd, is het belangrijk om rekening te houden met de geschiktheid van verschillende soorten glas en flessen. Flessen van borosilicaatglas kunnen veilig worden geautoclaveerd, omdat het materiaal zeer goed bestand is tegen thermische schokken. Er is een veel hoger risico op breuk bij het autoclaveren van glazen flessen die zijn gemaakt van natriumkalk of flintglas en hoewel het mogelijk blijft om flessen van dit type te autoclaveren, beschikt het materiaal niet over dezelfde veiligheidsmarge.
Laboratoriumflessen met kunststofcoating kunnen ook veilig worden geautoclaveerd, echter is het materiaal van de coating tijdens het autoclaafproces vatbaar voor hydrolyse door stoom wat betekent dat ze doorgaans minder autoclaafcycli kunnen doorstaan dan glazen flessen zonder coating.
Gewoonlijk mag u glazen containers niet verder vullen dan 75 procent van de nominale capaciteit, omdat dit vloeistof-uitzetting en mogelijke schuimvorming mogelijk maakt en overlopen wordt voorkomen. Echter is de veilige vulcapaciteit afhankelijk van de aard van de vloeistof. Glazen flessen met water of waterige buffers kunnen tot de nominale vullijn van de container worden gevuld. Terwijl flessen die worden gebruikt om agar-gebaseerde media te steriliseren slechts tot 50% van de capaciteit van de container mogen worden gevuld.
2) Hoe moeten laboratoriumflessen in de autoclaaf worden geladen?
Om te beginnen is het raadzaam om bij het gebruik van een autoclaaf persoonlijke beschermingsmiddelen te dragen. Dit omvat doorgaans het volgende: volledige oog-/gelaatsbescherming, schoenen met gesloten teen en hittebestendige handschoenen om voorwerpen te verwijderen, met name heet glaswerk.
Zorg ervoor dat de autoclaaf niet te vol geladen wordt zodat stoom kan circuleren voor een effectief sterilisatieproces. Het is ook raadzaam om ervoor te zorgen dat flessen zijn gereinigd voordat ze in een autoclaaf worden geplaatst. Hierdoor wordt er voorkomen dat er vervuilende substanties op de wanden van de glazen fles worden gebakken.
In grote zware flessen, zoals flessen van 20 l, moet ook een kleine hoeveelheid gedistilleerd water (WFI of gezuiverd) worden gedaan om stoom te helpen genereren wanneer deze droog (leeg) worden gesteriliseerd in een autoclaaf.
3) Hoe moeten glazen flessen met schroefdoppen met stoom worden gesteriliseerd?
Bij het steriliseren of autoclaveren van flessen moet de schroefdop losjes worden aangebracht met een maximum van één slag. In een gesloten vat zal de inhoud uitzetten, wat een groot drukverschil veroorzaakt (meer dan 4 bar absoluut), wat kan leiden tot een explosieve storing. Bovendien kunnen doppen die niet voldoende zijn losgeschroefd een vacuüm in de fles creëren tijdens de koelfase. Als flessen niet goed ontlucht zijn, kan de vloeistof in de fles niet koken tijdens de recoolingfase en blijft de vloeistof dus gedurende langere tijd oververhit. Verzegel of verplaats nooit containers met oververhitte vloeistoffen. Als de dop los blijft zitten (1/2 slag), is er geen drukverschil tussen de stoom in de autoclaaf en de binnenkant van de fles.
Flessen kunnen eventueel veilig worden geautoclaveerd met verzegelde doppen als de stoomautoclaaf een ondersteunende drukcompensatie heeft.
In conventionele autoclaven (zonder drukcompensatie) is een membraanontluchtingsdop een veiligere en handige optie. Een tweeweg-drukvereffening vindt plaats via het ePTFE-membraan van 0,2 micron, terwijl de dop goed gesloten kan blijven om het risico op verontreiniging te verminderen nadat het autoclaafproces is voltooid. Membraanontluchtingsdoppen mogen niet worden gebruikt bij flessen groter dan 3500 ml.
Voor GMP-activiteiten, medische toepassingen of voor flessen van 5 liter of groter zou het gebruik van een aansluitdop met één poort, voorzien van een steriel ontluchtingsfilter, een geschikter optie zijn dan de membraandoppen. Een roestvrijstalen GL 45 dop met één poort kan bijvoorbeeld worden gebruikt met een goedgekeurde steriele-lucht 0,2 micron 50 mm schijf of capsulefilter van farmaceutische kwaliteit. Deze optie wordt vooral aanbevolen voor grotere flessen van meer dan 2 liter.
4) Moet ik de bovenkant van de flessen met aluminiumfolie afdekken voordat deze worden geautoclaveerd?
Dit behoort tot de normale gang van zaken in veel onderzoekslaboratoria, maar het aanbrengen van folie over de opening van glazen containers vermindert de kans dat deze items om te beginnen goed worden gesteriliseerd. De folie moet los worden aangebracht om het binnendringen van stoom mogelijk te maken en biedt na sterilisatie geen bescherming tegen verontreiniging.
5) Hoe lang moet de autoclaafcyclus duren?
Stoomsterilisatie wordt aanbevolen bij + 121, 126 of + 134°C, afhankelijk van de toepassing. Als richtlijn stelt de Britse standaard BS EN 285:1997 8.3.1: "De houdtijd moet niet minder zijn dan 15 min, 10 min en 3 min voor sterilisatietemperaturen van respectievelijk 121°C, 126°C en 134°C."
Het is een goede gewoonte om een biologische of chemische indicator te gebruiken om te bevestigen dat de autoclaaf naar behoren werkt. Als een van beide indicatoren niet werkt, moet de autoclaaf worden onderzocht om het probleem te identificeren en op te lossen. Het is ook van cruciaal belang om de lading opnieuw te autoclaveren zodra het probleem is opgelost om steriliteit te garanderen.
Er kan ook autoclaaftape op items worden geplaatst, waarbij markeringen op de tape zichtbaar worden zodra de kritieke temperatuur is bereikt. In tegenstelling tot andere methoden, zoals biologische indicatoren, biedt autoclaaftape echter geen bevestiging van sterilisatie. In plaats daarvan kan het worden gebruikt om geautoclaveerde versus niet-geautoclaveerde items te identificeren.
Ten slotte, als u de autoclaaf uitlaadt, moet u ervoor zorgen dat u opzij stapt om uw gezicht en lichaam uit de buurt van de deur en de stoom te houden. Het is ook raadzaam om, indien mogelijk, de deur te openen en tien minuten te wachten zodat de items kunnen afkoelen. Laat geautoclaveerde materialen altijd afkoelen tot kamertemperatuur voordat u ze transporteert.
6) Hoe vaak kunnen laboratoriumflessen worden geautoclaveerd?
Het aantal autoclaafcycli waaraan een product kan worden blootgesteld, is afhankelijk van het type glazen fles dat wordt geautoclaveerd, zo zijn natriumkalkflessen en flessen met kunststofcoating bestand tegen minder autoclaafcycli dan ongecoate borosilicaat 3.3-laboratoriumflessen.
Ondanks de uitstekende weerstand van borosilicaat 3.3 tegen thermische schokken kunnen deze flessen beschadigd raken en na verloop van tijd ongeschikt worden voor autoclaveren. Dit komt omdat de meeste treksterkte van borosilicaatglas in de staat van het oppervlak zit en als het glas bekrast is, zelfs submicroscopisch, is de sterkte ervan sterk verminderd. Dus terwijl flessen met een onbekrast oppervlak herhaalde drukcycli veilig kunnen doorstaan, geldt dit voor oudere flessen misschien niet.
Helaas is het onmogelijk te voorspellen wanneer een oudere fles het zou kunnen begeven. DWK Life Sciences raadt daarom aan om artikelen routinematig te vervangen en elk artikel voorafgaand aan gebruik grondig te inspecteren op tekenen van krassen, splinters of andere defecten. Indien hiervan sprake is, moet het product uit bedrijf worden genomen en onmiddellijk worden weggegooid.